目的 探究程序性死亡受体 探究程序性死亡受体 -1（Programmed death-1, PD-1）及其配体1（PD-1 ligand 1，PD-L1）在原发性胆汁管炎 在原发性胆汁管炎 （Primary Biliary Cholangitis, PBC）免疫机制中 的作用。 方法 收集 PBC患者外周血和肝脏病理标本，流式细胞术检测PD-1在PBC患者CD8+ T细胞和Treg细胞的表达情况，免疫荧光共定位检测PD-L1在肝脏胆管细胞表达情况，ELISA测定血浆中PD-1/PD-L1通路相关细胞因子表达水平，RT-PCR法测定CD8+ T淋巴细胞中PD-1/PD-L1通路相关调控通路的表达。通过体外细胞共培 通过体外细胞共培 养， 探究 PD -1/PD 1/PD-L1 通路调控在 CD8CD8 + 细胞毒中对 PBCPBCPBC靶细胞人肝内胆管上 皮细胞杀伤作用中的。 结果 本研究共入组就诊于北京协和医院 本研究共入组就诊于北京协和医院 的 PBCPBCPBC患者 69 例，健康对照者 58例。 PBCPBCPBC患者外周血 CD8+ T淋巴细胞PD -1表达 （12.0±8.8%）比健康对照（19.9±12.5%）降低 （p < 0.001），PBC患者Treg细胞比例（5.6±3.7%）较健康对照（7.4±2.4%）显著下降（p = 0.005），且PD -1+ 细胞占 FoxP3FoxP3 FoxP3+ CD 4+ T细胞比例显著升高（29.9±11.8% v.s.25.8±8.1%, p = 0.044）。PBC PBC PBC PBC 组血浆 IL -10 浓度 、IFNIFNIFN-γ 浓度 、TGF TGF-β 浓度 高于 健康对照 （IL -10 8.29±9.00 pg/ml 8.29±9.00 pg/ml 8.29±9.00 pg/ml 8.29±9.00 pg/ml 8.29±9.00 pg/ml v.s.v.s. 4.43 ±5.08 pg/ml pg/ml pg/ml, p=0.0066 ; IFNIFNIFN-γ 51.94±52.94 51.94±52.94 pg/ml pg/ml pg/ml v.s.v.s. 26.71±26.26 26.71±26.26 pg/ml,pg/ml,pg/ml, pg/ml, p = 0.0015 ；TGF TGF-β 1302.0±1972.8 pg/ml 1302.0±1972.8 pg/ml 1302.0±1972.8 pg/ml 1302.0±1972.8 pg/ml 1302.0±1972.8 pg/ml v.s. v.s. 205.8±298.9 205.8±298.9 pg/ml pg/ml pg/ml，p = 0.0018= 0.0018= 0.0018 ）。RT-PCR测定发现PBCPBCPBC组（ n=21 n=21 ）较健康对照组 （n= 19 ）CD8CD8 + T淋巴细胞 TbetTbet Tbet基因 表达量升高（ 3.03±4.23 v.s. 0.82±0.76 3.03±4.23 v.s. 0.82±0.76 3.03±4.23 v.s. 0.82±0.763.03±4.23 v.s. 0.82±0.76 3.03±4.23 v.s. 0.82±0.76 3.03±4.23 v.s. 0.82±0.76 ，p =0.028=0.028 ）， Pdcd dcd1基因 表达有下降趋势 ，但无统计学意义 （0.59±0.73 0.59±0.73 v.s. v.s. 1.49±2.2 1.49±2.2 0，p = 0. 110110 ）。 肝脏 免疫 荧光共定位发现， PBCPBCPBC患者组 肝脏内 PD -L1 阳性细胞较少，未见胆管与 阳性细胞较少，未见胆管与 阳性细胞较少，未见胆管与 PD -L1 双阳性细胞。在与 HiBEC HiBEC 共培养体系中， PD -1+ CD8CD8 + T细胞较 PD -1- CD8CD8 + T细胞 细胞毒杀伤能力弱，增殖 细胞毒杀伤能力弱，增殖 下降 ，TGF TGF-β、IF N-γ 有下降趋势， 且靶细胞凋亡相对较少有下降趋势， 且靶细胞凋亡相对较少这种效应在一定程度上可以被抗 PD -1抗体拮，而在 PD -L1 促进下有所增强。 促进下有所增强。 结论 在 PBCPBCPBC的发病免疫机制中， 的发病免疫机制中， PD -1上游核内转录因子 Tbet Tbet表达上调，抑制 表达上调，抑制 了 CD8CD8 + T细胞 PD -1的表达，引起了 CD8CD8 + T细胞 表面 PD -1表达降低，同时胆管 上皮细胞 PD -L1 可能存在表达下调。包括 可能存在表达下调。包括 可能存在表达下调。包括 IL -10 、IFN-γ、TGF TGF-β 等细胞因子的相 等细胞因子的相 互作用和共同调节下， PD -1/PD 1/PD-L1通路沉默，低 通路沉默，低 PD -1表达的 CD8CD8 + T细胞增 殖多、细胞毒性功能增强产生相关因子，负调节的 多、细胞毒性功能增强产生相关因子，负调节的 多、细胞毒性功能增强产生相关因子，负调节的 多、细胞毒性功能增强产生相关因子，负调节的 TregTreg Treg细胞减少，引起对肝 细胞减少，引起对肝 细胞减少，引起对肝 内胆管上皮细胞的杀伤作用。

We analyzed 69 patients diagnosed with PBC at Peking Union Medical College Hospitalas well as 58 health controls (HC). The proportion of perifheral PD-1+ CD8+T cell decreased in PBC (12.0 ± 8.8%) than HC (19.9 ± 12.5%) (p<0.001). PBC patients had less Treg cells (5.6 ± 3.7%) than HC (7.4 ± 2.4%) (p= 0.005), with increased proportion of PD-1+cells in FoxP3+CD4+T cells (29.9 ± 11.8% vs 25.8 ± 8.1%, p= 0.044). The plasma concentration of IL-10, IFN-γ and TGF-β in the PBC group werehigher than that in HC(8.29±9.00 pg/mlv.s.4.43±5.08pg/ml, p=0.0066;51.94 ± 52.94 vs 26.71 ± 26.26 pg/ml, p= 0.0015; 1302.0 ± 1972.8 pg/ml vs 205.8 ± 298.9 pg/ml, p= 0.0018, resp.). Compared with HC (n=19), Tbetgeneexpression in CD8+T lymphocyteswas increase in PBCgroup (n=21)(0.82 ± 0.76vs 3.03 ± 4.23, p= 0.028), with decreasedtrend of Pdcd1gene expression (0.59 ± 0.73 vs 1.49 ± 2.20, p= 0.110).Immunofluorescence co-localization revealed that PD-L1positive cells were less in PBC patients and without expression onHiBEC compared to HC. In the CTL and HiBEC co-culture, compared to PD-1-CD8+T cells, the cytotoxicity of PD-1+CD8+T cells was weaker,with lessproliferationandtendency of decreased production of IFN-γ and TGF-β. Meawhile, HiBEC apoptosis was relatively more in PD-1-CD8+T cells co-cluture group. Theseeffectscould be antagonized by anti-PD-1 antibodyand enhanced by PD-L1. Conclusion:In PBC,the expression of Tbet is up-regulated,which leads to the down-regulated expression of PD-1 on CD8+T cells. Meanwhile, the expression of PD-L1 in HiBEC may be down-regulated. The silenced PD-1/PD-L1 pathway, decreased Treg cells as well as the interaction and co-regulationof cytokines including IL-10, IFN-γ and TGF-β, causemore CD8+T cells proliferation, more related cytokines production and the enhanced CTL cytotoxic effects on HiBEC.